Luciferázový reportérový systém s extrémně stabilním bioluminiscenčním signálem (typu glow)
Oblast: Proteinové inženýrství
Motivace/současný stav:
Luminiscenční reportéry jsou užitečné a oblíbené nástroje v biotechnologickém výzkumu. Lze s nimi, pomocí měření optického signálu, snadno, rychle, bezpečně a s vysokou citlivostí, monitorovat biologické, biochemické a chemické procesy. Luminiscence je iniciována excitací luminiscenčních molekul do vysokoenergetického stavu. Návrat těchto molekul do základního stavu s nižší energií je doprovázen uvolněním fotonu, pozorovatelného jako emise světla. Bioluminiscence je fascinující jev představující emisi světla živým tvorem. O využití bioluminiscenčních systémů k navrhování nových vysoce citlivých biologických testů je obrovský zájem.
Nicméně navzdory mnoha pokrokům a vylepšením luciferáz zůstávají zachována dvě hlavní omezení. Za prvé, zábleskový typ bioluminiscenčního signálu s krátkým poločasem rozpadu znemožňuje dlouhodobý sběr signálu a analýzy. Za druhé, mírná afinita k substrátu neumožňuje analýzy při nižších koncentracích substrátu se zachovanou úrovní detekovaného bioluminiscenčního signálu.
Popis technologie:
Vynálezem jsou luciferázy typu Renilla s modifikovanými proteinovými sekvencemi, které využívají široce dostupný, necytotoxický a levný koelenterazinový luciferin. Tyto nové luciferázy vykazují extrémně stabilní světelnou emisi typu glow, vysokou afinitu k substrátu, nízký inhibiční faktor produktem a modulovatelné emisní maximum. Luciferázy jsou navrženy tak, aby poskytovaly vysoce citlivý a stabilní bioluminiscenční signál pro širokou škálu laboratorních aplikací a formátů biologických testů.
Výhody technologie:
- extrémně stabilní bioluminiscenční signál typu glow
- vysoká afinita k luciferinovému substrátu
- nízká inhibice produktem
- zvýšená termostabilita
- vysoká odolnost vůči inaktivaci
- vysoká exprese a rozpustnost
- žádná cytotoxicita
- modulovatelná světelná emise umožňující multiplexování
- velmi dobře krystalizuje a má vysokou difrakční kvalitu
Aplikační oblast:
- široká škála aplikací v biosenzorech, reportérových systémech a dalších formátech testů
- zobrazování in vitro a in vivo
- zobrazování dlouhých časových úseků, po které zůstává bioluminiscenční signál stabilní
- vhodné pro technologie rezonančního přenosu energie (BRET)
- optimalizované kodony genových reportérů pro bakteriální nebo savčí expresi
- luciferázy s His-tag pro afinitní purifikaci a imunodetekci
- rekombinantně vyrobené a purifikované luciferázy připravené k okamžitému použití
Komerční příležitost:
- Hledáme partnera, který by tuto technologii vyvinul do podoby komerčního produktu – jako sadu pro biologické zobrazování in vitro a in vivo.
- Technologii je také možné licencovat.
Ochrana duševního vlastnictví:
Patentová přihláška PCT